Hepatitis C er en infektion i leveren forårsaget af Flaviviridae HCV-virus, som består af et eller flere RNA-molekyler. Som regel tages der en række diagnostiske tiltag for at påvise hepatitis C hos en patient. PCR er en analyse, der præcist bekræfter diagnosen. Ofte gives konklusionen af læger, når patienten allerede har de første tegn på sygdommen.
Hvad er hepatitis C
Leverskade som følge af en virusinfektion, der overføres gennem blod eller seksuel kontakt, kaldes i medicin hepatitis C. Det forårsagende agens er en RNA-holdig virus af ikke-cellulære infektionsstoffer fra Flaviviridae-familien. Infektionen kan blive i kroppen i lang tid uden at vise sig. Derfor er hepatitis C (som diagnose) kun berettiget, når en mikroorganisme påvises ved hjælp af en blodprøve med PCR RNA RNA.
Flavivirus produceres ikke i kunstigt dyrkede isolerede celler. I reproduktionsprocessen skaber det infektiøse middel immunologisk adskilte modifikationer. Disse faktorer forhindrer kroppen i at givepassende beskyttelsesrespons, og eksperter har svært ved at udvikle en effektiv vaccine.
Virusen overføres parenter alt. For infektion skal det trænge ind i tilstrækkelige mængder direkte i blodbanen.
Hvilke tests udføres for hepatitis C
Virale patologier i leveren diagnosticeres ved hjælp af laboratorietests. Kliniske undersøgelser af hepatitis C udføres ved at studere fremmede og farlige antigener eller proteinforbindelser (antistoffer) i patientens biomateriale, hovedsageligt i blodet.
- Enzymatisk immunoassay (ELISA). Metoden er baseret på påvisning af lgM-antistoffer i blodet. Immunoglobulin betragtes som det største og er en pentamer. Det manifesterer sig i lymfocytters primære beskyttende respons på et ukendt fremmed stof.
- Radioimmunoassay (RIA) - kvantitativ bestemmelse af lgM-immunoglobulin under anvendelse af en mærket radioaktiv isotop af jod.
- PCR af hepatitis C - bestemmelse af vir alt RNA i biomaterialet (blod). Denne analyse bekræfter pålideligt diagnosen.
IgG-testning er ikke pålidelig. Dets tilstedeværelse i blodserumet kan indikere ikke kun tilstedeværelsen af et flavivirus, men også en anden tidligere infektion, der har det samme patogen.
Hvad bestemmer PCR-analyse
Polymerase-kædereaktion (PCR) er baseret på identifikation af DNA-regioner, der er specifikke for visse patogener i prøver af materiale til forskning (epitel, blod). Analysen gør det muligt at identificere patogene mindste organismer (vira) ved at påvise deres RNA eller DNA i biologisk materiale.
Laboratorieprocedure til påvisning af antistoffer Hepatitis C PCR udføres i 3 trin:
- Vælg. Det undersøgte biomateriale renses for urenheder, og DNA opnås i den mobile fase af den kromatografiske søjle.
- Forstærkning. Analysen udføres i enheden-termostatcykler. Den opvarmer og afkøler reagensglassene med en vis cyklicitet. For en undersøgelse udføres op til 35 cyklusser. Resultatet er et tilstrækkeligt antal DNA-fragmenter til at detektere, identificere og evaluere patogenet.
- Elektroforese. De resulterende fragmenter anbringes i en gel med forskellig mætning af agarose, og der udføres elektroforese. Det resulterende elektroferogram analyseres på en computer.
Ikke kun standard PCR-undersøgelsen bruges, men også Real Time PCR-analysen. Dette er re altidsdiagnostik. Metoden giver mulighed for kvalitativ og kvantitativ analyse, som gør det muligt at identificere sygdommens dannelse og dynamik samt ordinere terapi, der sigter mod at eliminere årsagen til patologiens oprindelse. Real-time PCR bruges også til at bestemme en ren kultur af infektiøse agenser (genotyping).
Hvordan udføres polymerasekædereaktionstesten
Til diagnose kan enhver menneskelig biologisk væske bruges. Biomateriale til test for hepatitis C er norm alt blod.
Sampling til diagnostik udføres i procedurenkontor. For at tage blod skal du bruge engangsreagensglas med et stof, der hæmmer blodpropper. Aktiviteter fokuseret på at forhindre spredning af smitsomme stoffer hjælper med at undgå, at en anden stamme af mikroorganismer trænger ind udefra.
Blod til PCR af hepatitis C tages om morgenen på tom mave. Prøven sendes straks til laboratoriet. Det er tilladt at opbevare biomaterialet ved en temperatur på +4 til +8 grader Celsius. Beholdere er mærket og forsynet med vejledning. Testresultater er tilgængelige inden for 48 timer, nogle gange tidligere.
Typer af PCR
Anvendelsesområdet for polymerasekædereaktionen er ret bredt. Infektionister bestemmer ved hjælp af PCR hepatitis B, sygdomme, der overføres af blodsugende insekter, AIDS, tuberkulose. Inden for onkologi, ved hjælp af denne metode, opdages tumorceller på et tidligt tidspunkt.
Der er omkring fjorten typer analyser. Anvendelsen af en eller anden type afhænger af analysernes omfang og endelige resultater. Nogle typer PCR er uundværlige, hvor resultatet er nødvendigt inden for 20 minutter.
Til at diagnosticere hepatitis C bruges 3 typer polymerasekædereaktion:
- Kvalitativ vurdering kan enten være positiv, hvilket indikerer tilstedeværelsen af en infektion i kroppen, eller negativ, hvilket indikerer fraværet af et flavivirus.
- Real-time PCR (kvantitativ analyse) - bestemmer patogenets kvantitative RNA i IE/ml.
- Genotyping er en analyse, der afslører typen (genotypen) af virussen.
For nøjagtigt at identificere og bestemme sygdommen, efterfulgt afalle tre typer undersøgelser bruges til at ordinere optimal terapi.
Kvalitativ polymerasekædereaktionsanalyse
En analyse er obligatorisk for alle, der har en ELISA, der har påvist antistoffer mod HCV. Den kvalitative PCR for hepatitis C er standardfølsomhedstesten. Metoden er kun rettet mod detektion, ingen tælling eller isolering af andre stoffer udføres.
For at påvise antistoffer anvendes specielle testsystemer med en følsomhedstærskel på mindst 50 IE/ml. Hvis der påvises antistoffer, ordineres andre afklarende tests. Hvis resultatet er negativt, vil der ikke blive udført yderligere test.
I nogle tilfælde kan et falsk negativt resultat skyldes inkompetente laboratoriepersonale eller reagenser af dårlig kvalitet. For forsikring er det bedre at gentage analysen et andet sted.
kvantitativ PCR
Metoden bruges til direkte at studere antallet af flavivirus i én reaktionscyklus. Til nøjagtig måling anvendes DNA-fragmenter, der anvendes til hybridisering, eller fluorescensmærkede primere. Der er en økonomisk detekteringsmulighed ved brug af SYBL Green farvestof. Farvestoffet kiles ind i en lille rille i DNA'et og bliver blåt, når det bestråles med en laser.
Koncentrationen bestemmes af apparatets forstærker i digital ækvivalent. Værdierne kan variere lidt mellem laboratorier og bør derfor sammenlignes med referenceværdier.
Kvantitativ PCRhepatitis C hjælper med at vælge den optimale dosis af lægemidler og bestemme behandlingens varighed. Hyppigheden af undersøgelsen afhænger af sygdomsstadiet, typen af genotype og det foreskrevne behandlingsforløb.
Genotypebestemmelse
Hepatitis C-virussen har en variabel genetisk sammensætning. Talrige modifikationer gør det umuligt at skabe en vaccine og komplicerer også behandlingen. I alt 11 genotyper og 100 undertyper er blevet identificeret og registreret. I landene i det tidligere USSR, hos personer inficeret med hepatitis C, påviser PCR hovedsageligt genotype 1b og 3.
I nærværelse af en hvilken som helst af genotyperne kan skrumpelever eller leverkræft boltre sig. Derfor er det så vigtigt at opdage virussen i tide.
For nogle patienter er visse lægemidler designet til at bekæmpe HCV giftige. Genotyping giver dig mulighed for at bestemme typen af protein og ordinere et effektivt lægemiddel.
I resultaterne af skrivetests er der et tal med et lille latinsk bogstav, der angiver virussens genotype. Hvis HCV påvises, men ikke indtastes, betyder det, at personen har en genotype, der ikke er typisk for et bestemt geografisk område.
Analyseresultater
Lægen beskæftiger sig med at tyde resultaterne. Kun data fra flere undersøgelser (sammen med anamnese og undersøgelse) kan give et samlet reelt billede af sygehistorien.
- I en rask person opdager en test for en kvalitativ reaktion i biomaterialet ikke noget. Hvis værdien "detekteret" er angivet, er infektionen bekræftet, og patientenhar brug for yderligere diagnose efterfulgt af behandling.
- Bestemmelse af antallet af smitsomme stoffer gør det muligt at vurdere den virale belastning på kroppen. Norm alt påviser hepatitis C kvantitativ PCR ikke patogenet. En indikator på op til 810^5 betragtes som en lav belastning og garanterer med korrekt terapi et gunstigt resultat. Højere værdier kræver dybdegående undersøgelse og fastlæggelse af langtidsterapi, for det positive resultat, som ingen kan stå inde for.
- Positive genotyperesultater indikerer, hvilken genotype der genkendes. Et negativt resultat indikerer enten fraværet af et flavivirus eller tilstedeværelsen af en genotype, der ikke er typisk for denne region.
Hvad indikerer en positiv PCR-test
Enhver alvorlig sygdom kræver en omfattende diagnose. En positiv hepatitis C PCR bekræfter diagnosen, men forudsigelser kan kun foretages efter yderligere laboratorie- og instrumentelle undersøgelser.
Detektion af en virus giver ikke et fuldstændigt billede af patologien. Det er nødvendigt at identificere dens type og natur for at bestemme, hvordan det påvirker leveren og andre organer. Tidlig påvisning af HCV har ofte et gunstigt terapeutisk resultat.
Negativ PCR med positiv ELISA
Når man observerer symptomer, der er karakteristiske for leverskade, er der stor sandsynlighed for, at infektionen allerede er trængt ind i kroppen. Derfor bør du kontakte en leverlæge eller en infektionsspecialist. Under samtalerne vil specialisten indsamle en anamnese og ordinere den nødvendige undersøgelse.
Hvisresultaterne af undersøgelser af hepatitis C PCR er negative, og enzymimmunoassayet er positivt, hvilket indikerer tilstedeværelsen af antistoffer mod flavivirus i blodet. Dette sker norm alt, når infektionen kommer ind i kroppen i en lille mængde, så immunsystemet klarede det på egen hånd. Men sådanne mennesker anses stadig for at være smittet og skal undersøges hver 6. måned. Hvis en person med sådanne testresultater nægtes en gratis lægeundersøgelse, er det bedre at tage en PCR mod betaling for at bevare helbredet, og hvis resultaterne er positive, kontakt en specialist for diagnose og behandling.
Fordele og ulemper ved metoden
Når diagnosen hepatitis C stilles, har PCR flere fordele:
- Tidlig påvisning af patogen.
- Nøjagtig definition af virussen.
- Effektivitet af diagnostik.
- Minimum fejlrate.
- Høj følsomhed.
Ulemper ved metoden:
- Høje analyseomkostninger. Testen kræver dyrt udstyr, reagenser og højt kvalificeret medicinsk personale. Alt sammen udgør et betragteligt beløb.
- Strenge krav til transport af biomateriale.
Behandling af betændelse i leveren
PCR-analyse for hepatitis C-virus anses for at være fundamental for diagnosen, men ikke endelig. For at terapien skal være effektiv kræves der en række yderligere laboratorie- og instrumentelle undersøgelser. Efter at have bestået allediagnostiske foranst altninger lægen ordinerer behandling:
- Diæt 5 er ordineret.
- Alkohol er fuldstændig udelukket.
- Fælles modtagelse af Interferon og Ribavirin i 25 dage.
- Kurser af hepaprotectors "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- I særlige tilfælde anvendes diskret plasmaferese.
Medicin ordineret af en hepatolog bruges regelmæssigt uden at ændre doseringen. Varigheden af at tage stofferne bestemmes af lægen efter at have bestået kontroltestene. Efter at have afsluttet terapiforløbet skal du besøge lægen hver sjette måned.
PCR-diagnostik gør det muligt at identificere årsagen til hepatitis C på et tidligt tidspunkt. Dette bidrager til effektiviteten af behandlingen og forebyggelsen af sygdommens overgang til så farlige former som skrumpelever og hepatocellulært karcinom.
