Colorimetrisk metode - en analyse baseret på en sammenligning af farvemætningen af de undersøgte og kendte stoffer. Resultaterne af fysiske og kemiske tests er af stor værdi for mange grene af videnskaben, men mest af alt bruges forskningen i medicin.
essensen af den kolorimetriske metode
Der er mange typer test, der bestemmer den kemiske sammensætning af stoffer. Nogle af dem er universelle og er meget udbredt inden for forskellige områder, andre er specifikke med højere nøjagtighed. Den kolorimetriske metode er universel.
Essensen af analysen ligger i, at farvemætningen af en opløsning med en ukendt koncentration sammenlignes med farven af en standardopløsning. Under analysen, som et resultat af interaktionen af den undersøgte komponent med et bestemt reagens, dannes en farvet forbindelse. Efter afslutning af reaktionen sammenlignes den resulterende nuance med farven på opløsningerne, hvis koncentration allerede er kendt.
Det menes, at grundlæggeren af kolorimetri er Robert Boyle. Han brugte squeezetanniner for at skelne jern fra kobber i opløsning. Det var Boyle, der lagde mærke til, at jo større koncentrationen af jern i opløsningen var, desto rigere er tonen i sidstnævnte.
Colorimetry
Colorimetri er en metode til at bestemme mængden af et stof i opløsninger. Analysen er baseret på Bouguer-Lambert-Beers lov: når en lysstråle rammer et tæt absorberende lag af et stof, svækkes dets intensitet.
Den kolorimetriske metode til at bestemme koncentrationen af et stof kan bruge en visuel sammenligning eller sammenligning ved hjælp af specielle instrumenter til at måle farveintensitet. Sammenligningen er foretaget på en direkte og kompenserende måde.
- Lige. Metoden går ud på at sammenligne farveniveauet af testopløsningen ved en bestemt densitet og temperatur af væsken med en referenceopløsning. Ved brug af fotokolorimetre og spektrofotometre anvendes destilleret vand som referenceopløsning. Enhederne måler intensiteten af strømmen, som afhænger af lysets intensitet.
- Kompenserende. Metoden er baseret på at bringe farven på den undersøgte prøve til referencen. Resultatet opnås ved at tilføje et opløsningsmiddel eller øge højden af laget af det farvede medium.
Brugen af et spektrofotometer, monokromator og andre præcisionsinstrumenter forenkler yderligere den allerede simple forskningsmetode og giver dig mulighed for at øge nøjagtigheden af resultaterne. Disse enheder er i stand til at måle mængden af lystransmission og bestemme bølgelængden.
Hvor analyse anvendes
Colorimetrisk analysemetode bruges, når den nøjagtige kemiske sammensætning er kendt, der er en referenceprøve til sammenligning, og temperaturen på testen og referenceprøven er den samme. Hvis du hurtigt skal bestemme mængden af et farvet stof, men det er så lille, at det er umuligt at anvende den analytiske metode.
Colorimetri er meget brugt i medicin til klinisk biokemisk forskning og andre områder:
- farmaceutisk industri;
- fødevare- og alkoholindustrien;
- agronomi (bestemmelse af jordkvalitet).
Fordele og ulemper
Den kolorimetriske metode har som enhver anden fordele og ulemper.
Fordelene omfatter følgende:
- let at analysere, minimum forberedende procedurer;
- mulighed for test selv med en lille mængde testmateriale;
- der er ikke behov for dyrt udstyr, selvom moderne enheder, der ikke er billige, er blevet brugt i stigende grad på det seneste. Men de giver det mest nøjagtige resultat.
Ulempe: lav analysenøjagtighed sammenlignet med analytiske metoder.
Biuret-metode til proteinbestemmelse
Protein i blodserum er en indikator, der afspejler tilstanden af homeostase. En stigning i koncentrationen af en makromolekylær forbindelse i blodet kaldes hyperproteinæmi, et lavt indhold kaldes hypoproteinæmi.
Proteiner iblodserum har en anden sammensætning, struktur, egenskaber, udfører forskellige funktioner. De er opdelt i enzymer, hormoner, immunglobuliner og andre. Alle grupper af proteiner har en række fælles karakteristika, på grundlag af hvilke der er udviklet metoder til bestemmelse af makromolekylære organiske forbindelser i biologiske væsker.
Af alle metoderne inden for klinisk biokemi bruges kolorimetriske metoder til at bestemme protein oftest. De er relativt billige, hvilket er vigtigt for budgetorganisationer. og er ret simple. Den mest almindelige er biuretmetoden. Essensen af metoden: proteiner i et alkalisk miljø reagerer med kobbersulfat og danner lilla forbindelser. Proteinindholdet i blodet bestemmes af farvningens mætning. Biomateriale til analyse tages om morgenen på tom mave.
Analysen er meget nøjagtig, men der er faktorer, der påvirker koncentrationen af protein i blodet:
- fysisk aktivitet kort før biomaterialeprøvetagning;
- sidste uger af graviditet og amning;
- brugen af stofferne Corticotropin, Miscleron, Clofibrate øger proteinindholdet i blodet, og brugen af Pyrazinamid og østrogen - for at reducere koncentrationen;
- forkert håndposition under prøveudtagning af biomateriale.
Bestemmelse af jern
Mængden af jern i blodet er en af hovedindikatorerne ved diagnosticering af forskellige sygdomme. Stoffet er koncentreret i hæmoglobin, som sikrer transporten af ilt til vævene. Tilbestemmelse af jern ved den kolorimetriske metode, oftest bruges en opløsning af bathophenanthrolin (0,02%) som hovedreagens. Biomateriale - serum uden spor af hæmolyse.
Essensen af metoden: interaktionen af jernholdige ioner og sulfateret bathophenanthrolin danner et farvet kompleks, hvis mætning bestemmes fotometrisk. For at opnå en klar opløsning er det nødvendigt at følge reglerne for prøveudtagning af biomaterialet, men for nøjagtigt at bestemme de optiske tætheder af jern-ligandkomplekser frigives jern fra hæmoglobin ved hjælp af hydroxylamin og rengøringsmidler (natriumdodecylsulfat). Testresultatet bestemmer tilstedeværelsen og graden af patologi. Normal jernkoncentration bør være:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (mænd);
- 10, 6-21, 7 µmol/L (kvinder).
Jernmangel er norm alt forbundet med blodtab, utilstrækkelig kostindtagelse eller dårlig optagelse fra mave-tarmkanalen.
kolesteroltest
Kolesterol er et organisk stof, der findes i cellevæggen i mange organismer, inklusive mennesker. Det er nødvendigt for produktionen af cholecalciferol og steroidhormoner. Et kolesterolniveau på 3,37-5,2 mmol/L anses for norm alt. Forhøjet indhold er en af hovedårsagerne til åreforkalkning.
Colorimetriske metoder til bestemmelse af kolesterol giver dig mulighed for at genkende karsygdomme på et tidligt tidspunkt. Ifølge patoanatomiske resultater i dødelig udfald af iskæmi, koncentrationen af lipofil alkohol hos patientervar 6,5-7,8 mmol/L.
Princippet for den kolorimetriske metode er, at kolesterol oxideres af 3beta-hydroxy-steroid oxidoreduktase og frigiver hydrogenperoxid, som omdanner p-aminoatipyrin til en farvet forbindelse. Indholdet af kolesterol bestemmes af farvemætningen.
Når der udføres en test på et barn, skal det tages i betragtning, at koncentrationen af kolesterol i barndommen ikke bør overstige 4,1 mmol/l.
Hvad er den enzymatiske kolorimetriske metode?
Enzymatiske test er baseret på brugen af reaktioner fra enzymer med høj aktivitet. De er meget brugt i analytisk kemi til at bestemme forskellige stoffer - fra nitrationer til makromolekyler.
Enzymatiske (enzymatiske) metoder er specifikke, hvilket gør det muligt at analysere visse stoffer i nærværelse af andre stoffer med lignende sammensætning. De mest almindelige metoder baseret på brugen af enzymet - glucoseoxidase. Testen bruges til at bestemme koncentrationen af glukose i blodet. Nøjagtigheden af testen gør, at den kan bruges til at justere doseringen af hypoglykæmiske midler hos patienter med type 2-diabetes.
Glucoseoxidantmetode anses for at være en af de bedste kvantitative metoder til bestemmelse af glucose. Både blod (kapillær) og serum kan bruges som et biomateriale, men plasma er mere at foretrække, fordi det har et lavere hæmatokritindhold, hvilket negativt påvirker nøjagtigheden af resultatet.
Den kinetiske metode til fotometri bruges hovedsageligt. Dens essens ligger i det faktum, atdet etablerede forhold mellem glucoseoxidase og peroxidase, i et vist tidsrum efter starten af reaktionen, vil hastigheden af dannelsen af en farvet forbindelse være i forhold til niveauet af glucose i prøven. Den største fordel ved testen er, at resultatet ikke påvirkes af tilstedeværelsen af tredjepartsforbindelser i prøven. Metoden har også en ulempe - dyre måleinstrumenter fra tyske eller svenske producenter kræves til testen.
Konklusion
Den kolorimetriske metode er nøjagtig og nem at bruge. Dets brug i medicin tillader tidlig påvisning af forskellige patologiske ændringer i kroppen. Med introduktionen af nye teknologier bliver metoden forbedret og bliver mere og mere populær.
