Laboratoriediagnose af næsten alle infektionssygdomme er baseret på påvisning af antistoffer i patientens blod, som produceres mod patogenets antigener, ved hjælp af serologiske reaktionsmetoder. De begyndte i lægepraksis fra slutningen af det nittende til begyndelsen af det tyvende århundrede.
Udviklingen af videnskab har hjulpet med at bestemme mikrobernes antigene struktur og de kemiske formler for deres toksiner. Dette gjorde det muligt at skabe ikke kun terapeutiske, men også diagnostiske sera. De opnås ved at administrere svækkede patogener til laboratoriedyr. Efter flere dages eksponering bruges blodet fra kaniner eller mus til at forberede præparater, der bruges til at identificere mikrober eller deres toksiner ved hjælp af serologiske tests.
Den ydre manifestation af en sådan reaktion afhænger af betingelserne for dens indstilling og af tilstanden af antigener i patientens blod. Hvis mikrobielle partikler er uopløselige, udfældes, lyseres, bindes eller immobiliseres de i serumet. Hvis antigenerne er opløselige, så opstår fænomenet neutralisering eller udfældning.
Agglutinationsreaktion (RA)
Den serologiske agglutinationstest er meget specifik. Det er let at udføre og ganskevisuelt, for hurtigt at bestemme tilstedeværelsen af antigener i patientens blodserum. Det bruges til at teste Vidal-reaktionen (diagnose af tyfus- og paratyfusfeber) og Weigl (tyfusfeber).
Det er baseret på en specifik interaktion mellem humane antistoffer (eller agglutininer) og mikrobielle celler (agglutenogener). Efter deres vekselvirkning dannes der partikler, der udfælder. Dette er et positivt tegn. Levende eller dræbte mikrobielle midler, svampe, protozoer, blodceller og somatiske celler kan bruges til at opsætte reaktionen.
Kemisk er reaktionen opdelt i to trin:
- Specifik forbindelse mellem antistoffer (AT) med antigener (AG).
- Ikke-specifik - udfældning af AG-AT-konglomerater, det vil sige dannelsen af agglutinat.
Indirekte agglutinationsreaktion (IPHA)
Denne reaktion er mere følsom end den forrige. Det bruges til at diagnosticere sygdomme forårsaget af bakterier, intracellulære parasitter og protozoer. Den er så specifik, at selv meget lave koncentrationer af antistoffer kan påvises.
Oprensede fårerythrocytter og menneskelige røde blodlegemer, der er forbehandlet med antistoffer eller antigener, bruges til produktionen (afhængigt af, hvad laboratorieteknikeren ønsker at finde). I nogle tilfælde behandles menneskelige røde blodlegemer med immunglobuliner. Serologiske reaktioner af erytrocytter anses for at have fundet sted, hvis de har sat sig på bunden af røret. Om en positiv reaktionsige, når cellerne er arrangeret i form af en omvendt paraply, der optager hele bunden. En negativ reaktion tælles, hvis erytrocytterne satte sig i en søjle eller i form af en knap i midten af bunden.
Nedbørsreaktion (RP)
Serologiske reaktioner af denne type bruges til at detektere ekstremt små partikler af antigener. Disse kan for eksempel være proteiner (eller dele deraf), forbindelser af proteiner med lipider eller kulhydrater, dele af bakterier, deres toksiner.
Sera til reaktionen opnås ved kunstigt at inficere dyr, norm alt kaniner. Ved denne metode kan du få absolut ethvert udfældende serum. Indstillingen af serologiske udfældningsreaktioner svarer i virkningsmekanisme til agglutinationsreaktioner. Antistoffer indeholdt i serumet kombineres med antigener i en kolloid opløsning og danner store proteinmolekyler, der aflejres på bunden af røret eller på substratet (gelen). Denne metode anses for meget specifik og kan detektere selv ubetydelige mængder af et stof.
Bruges til at diagnosticere pest, tularæmi, miltbrand, meningitis og andre sygdomme. Derudover er han involveret i en retsmedicinsk undersøgelse.
Geludfældningsreaktion
Serologiske reaktioner kan udføres ikke kun i et flydende medium, men også i agargel. Dette kaldes den diffuse nedbørsmetode. Med dens hjælp studeres sammensætningen af komplekse antigene blandinger. Denne metode er baseret på kemotakse af antigener til antistoffer og omvendt. I en gel bevæger de sigmod hinanden med forskellig hastighed og danner, mødes, nedbørslinjer. Hver linje er ét sæt AG-AT.
Eksotoksinneutraliseringsreaktion med antitoksin (PH)
Antitoksiske serum er i stand til at neutralisere virkningen af exotoksin produceret af mikroorganismer. Disse serologiske reaktioner er baseret på dette. Mikrobiologi bruger denne metode til at titrere sera, toksiner og toksoider og bestemme deres terapeutiske aktivitet. Effekten af toksinneutralisering bestemmes af konventionelle enheder - AE.
Takket være denne reaktion er det desuden muligt at bestemme arten eller typen af exotoksin. Dette bruges til diagnosticering af stivkrampe, difteri, botulisme. Undersøgelsen kan udføres både "på glas" og i gel.
Reaktion af lysis (RL)
Immunserum, som trænger ind i patientens krop, har udover sin hovedfunktion passiv immunitet også lyserende egenskaber. Det er i stand til at opløse mikrobielle midler, cellulære fremmedelementer og vira, der kommer ind i patientens krop. Afhængigt af specificiteten af de antistoffer, der er inkluderet i serum, isoleres bakteriolysiner, cytolysiner, spirochetoziner, hæmolysiner og andre.
Disse specifikke antistoffer kaldes "komplement". Det findes i næsten alle menneskelige kropsvæsker, har en kompleks proteinstruktur og er ekstremt følsom over for temperaturstigning, rystelser, syrer og direkte sollys. Men i tørret tilstand er det i stand til at fastholdedens lyserende egenskaber op til seks måneder.
Der er disse typer serologiske reaktioner af denne type:
- bakteriolyse;
- hæmolyse.
Bakteriolyse udføres ved hjælp af patientens blodserum og specifikt immunserum med levende mikrober. Hvis der er tilstrækkeligt med komplement i blodet, vil forskeren se bakterien lysere, og reaktionen vil blive betragtet som positiv.
Den anden serologiske reaktion af blodet er, at en suspension af patientens røde blodlegemer behandles med serum indeholdende hæmolysiner, som kun aktiveres i nærvær af en vis kompliment. Hvis der er en, så observerer laboratorieassistenten opløsningen af røde blodlegemer. Denne reaktion er meget brugt i moderne medicin til at bestemme komplementtiteren (det vil sige dens mindste mængde, der fremkalder erytrocytlyse) i blodserum og til at udføre en analyse for komplementfiksering. Det er på denne måde, at en serologisk test for syfilis udføres - Wasserman-reaktionen
Komplementfikseringsreaktion (CFR)
Denne reaktion bruges til at påvise antistoffer mod et infektionsstof i patientens blodserum samt til at identificere patogenet ved dets antigene struktur.
Hidtil har vi beskrevet simple serologiske reaktioner. RSK betragtes som en kompleks reaktion, da ikke to, men tre elementer interagerer i den: antistof, antigen og komplement. Dens essens ligger i det faktum, at interaktionen mellem antistoffet og antigenetforekommer kun i nærværelse af komplementproteiner, som er adsorberet på overfladen af det dannede AG-AT-kompleks.
Antigenerne selv, efter komplementtilsætning, gennemgår betydelige ændringer, som viser kvaliteten af reaktionen. Det kan være lyse, hæmolyse, immobilisering, bakteriedræbende eller bakteriostatisk virkning.
Reaktionen i sig selv sker i to faser:
- Danning af et antigen-antistofkompleks, der ikke er visuelt synligt for undersøgeren.
- Ændring i antigenet under påvirkning af komplement. Denne fase kan oftest spores med det blotte øje. Hvis reaktionen ikke er visuelt synlig, bruges et ekstra indikatorsystem til at identificere ændringer.
Indikatorsystem
Denne reaktion er baseret på komplementfiksering. Rensede ram-erythrocytter og komplementfrit hæmolytisk serum tilsættes til reagensglasset en time efter, at RSC er indstillet. Hvis et ubundet komplement forbliver i reagensglasset, vil det slutte sig til AG-AT-komplekset dannet mellem fåreblodceller og hæmolysin og få dem til at opløses. Det vil betyde, at RSK er negativ. Hvis erytrocytterne forblev intakte, er reaktionen derfor positiv.
Hemagglutinationstest (RGA)
Der er to fundament alt forskellige hæmagglutinationsreaktioner. En af dem er serologisk, den bruges til at bestemme blodgrupper. I dette tilfælde interagerer røde blodlegemer med antistoffer.
Og den andenreaktionen gælder ikke for serologisk, da røde blodlegemer reagerer med hæmagglutininer produceret af vira. Da hvert patogen kun virker på specifikke erytrocytter (kylling, lam, abe), kan denne reaktion betragtes som meget specifik.
Du kan se, om en reaktion er positiv eller negativ, ved placeringen af blodcellerne i bunden af reagensglasset. Hvis deres mønster ligner en omvendt paraply, er den ønskede virus til stede i patientens blod. Og hvis alle erytrocytterne er dannet som en møntsøjle, så er der ingen ønskede patogener.
Hæmagglutinationshæmningstest (HITA)
Dette er en meget specifik reaktion, der giver dig mulighed for at bestemme typen, typen af vira eller tilstedeværelsen af specifikke antistoffer i patientens blodserum.
Dens essens ligger i det faktum, at de antistoffer, der tilsættes til reagensglasset med testmaterialet, forhindrer aflejring af antigener på erytrocytter og derved standser hæmagglutination. Dette er et kvalitativt tegn på tilstedeværelsen i blodet af specifikke antigener for den specifikke virus, der søges efter.
Immunofluorescensreaktion (RIF)
Reaktionen er baseret på evnen til at påvise AG-AT-komplekser med fluorescerende mikroskopi efter deres behandling med fluorokromfarvestoffer. Denne metode er nem at håndtere, kræver ikke isolering af ren kultur og tager kort tid. Det er uundværligt for hurtig diagnosticering af infektionssygdomme.
I praksis er disse serologiske reaktioner opdelt i to typer: direkte og indirekte.
Direct RIF er produceret afantigen, som er forbehandlet med fluorescerende serum. Og den indirekte er, at lægemidlet først behandles med et konventionelt diagnosticum, der indeholder antigener for antistofferne af interesse, og derefter genanvendes det luminescerende serum, som er specifikt for proteinerne i AG-AT-komplekset, og mikrobielle celler blive synlig under mikroskopi.
