For nylig er der udviklet en pålidelig, meget følsom og hurtig metode til diagnosticering af forskellige infektionssygdomme hos mennesker. Denne metode kaldes "PCR-analyse". Hvad er det, hvad er dets essens, hvilke mikroorganismer kan det afsløre, og hvordan man tager det korrekt, vil vi fortælle i vores artikel.
Opdagelseshistorik
Opfandt polymerasekædereaktionsmetoden (PCR) af den amerikanske videnskabsmand Kary Mullis i 1983. Oprindeligt blev den diagnostiske metode patenteret af Cetus Corporation, hvor dens skaber arbejdede. Men i 1992 blev alle rettigheder og patenter solgt til Hoffman-La Roche. Derefter viste det sig, at lignende undersøgelser blev udført parallelt og blev registreret af andre amerikanske biologer, såsom Alice Chen, David Edgar, John Trell. I 1980 beskæftigede de sovjetiske videnskabsmænd A. Slyusarenko, A. Kaledin og S. Gorodetsky sig også med dette problem. Derfor var det umuligt at fastslå den eneste indehaver af ophavsretten. Mange fremtrædende biokemikere har ydet et vist bidrag til udviklingen af polymerasekædereaktionsteknikken og har patenteret deres innovationer. På nuværende tidspunkt er analysenPCR udføres over alt i specialudstyrede laboratorier.
essensen af PCR-diagnosemetoden
PCR-analyse: hvad er det, og hvordan virker det? Essensen af metoden er at øge volumenet af et bestemt mikrobielt miljø under kunstige forhold ved hjælp af et specielt DNA-polymeraseenzym. Til dette ganges det eksisterende DNA-materiale mange gange. Ved tilstedeværelse af en patogen mikroorganisme i prøven vil dens mængde således blive øget på grund af biokemiske laboratoriemanipulationer, og det vil ikke være svært at opdage bakterien under et mikroskop.
Hvordan udføres materialeforskning?
Påkrævet til analyse:
- DNA-matrix;
- primere, der forbinder enderne af et stykke materiale;
- varmebestandigt DNA-polymeraseenzym;
- kemikalier, der får enzymer til at fungere korrekt;
- bufferløsning nødvendig for at skabe passende betingelser for vækst og udvikling af DNA-materiale.
For at udføre PCR udføres 25-30 gentagelser, bestående af tre stadier: denaturering, annealing og forlængelse.
Til analysen af polymerkædereaktionen bruges en speciel enhed - en forstærker. Moderne udstyr giver dig mulighed for at indstille det nødvendige program til opvarmnings- og kølerør for at eliminere fejl under diagnostik.
Hvor bruges diagnostik?
Polymerkædereaktionsmetoden bruges inden for forskellige medicinske områder:
- kriminalister medden identificerer genetisk materiale såsom hår, spyt eller blod;
- PCR-blodprøve hjælper med genotypebestemmelse, f.eks. til at detektere en individuel genetisk iboende reaktion på et bestemt lægemiddel;
- bruger denne metode til at fastslå tilstedeværelsen af familiebånd mellem mennesker;
- Den mest populære PCR-metode er blevet inden for medicinsk diagnostik til at bestemme forskellige infektionssygdomme.
Hvilke infektioner registrerer PCR?
Så medicin har længe og med succes brugt PCR-analyse. Hvad det er, ved vi allerede. Og hvilke patogener kan påvises med det? Følgende infektionssygdomme diagnosticeres ved PCR-metoden:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mycoplasmosis;
- gardnerellose;
- infektiøs mononukleose;
- trichomoniasis;
- papillomvirusinfektion;
- tuberkulose;
- herpesinfektion type 1 og 2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- difteri;
- salmonellose;
- HIV-infektion.
PCR-metoder bruges også til diagnosticering af kræft.
Metodefordele
PCR-diagnostik har flere fordele:
- Høj følsomhed. Selv i tilstedeværelsen af kun nogle få molekyler af mikroorganisme-DNA, bestemmer PCR-analyse tilstedeværelsen af infektion. Metoden vil hjælpe med kroniske og latent forekommende sygdomme. Ofte i sådanne tilfælde, mikroorganismener ellers uopdyrkelig.
- Ethvert materiale er velegnet til forskning, såsom spyt, blod, genitale sekreter, hår, epitelceller. Den mest almindelige er analyse af blod og urogenital udstrygning for PCR.
- Ingen langsigtet beskæring påkrævet. Den automatiserede diagnostiske proces giver dig mulighed for at få resultaterne af undersøgelsen efter 4-5 timer.
- Metoden er næsten 100 % pålidelig. Kun isolerede tilfælde af falsk negative resultater er blevet registreret.
- Evnen til at identificere flere typer patogener fra en enkelt materialeprøve. Dette fremskynder ikke kun processen med at diagnosticere sygdommen, men reducerer også materielle omkostninger betydeligt. Ofte ordinerer lægen en omfattende PCR-analyse. Prisen for undersøgelsen, som består af bestemmelse af seks patogener, er omkring 1.500 rubler.
Anbefalinger til forberedelse til analyse
For at resultaterne skal være pålidelige under PCR-undersøgelsen, skal du tage testen efter anbefalingerne for indledende forberedelse til diagnose:
- Før du donerer spyt, bør du afstå fra at spise og tage medicin 4 timer før prøvetagning. Umiddelbart før proceduren skal du skylle munden med kogt vand.
- Ovenstående regler bør også følges, når du tager en prøve fra kindens indre overflade. Efter skylning anbefales det at udføre en let hudmassage for at fremhæve sekretionen af kirtlen.
- Urin opsamles norm alt derhjemme. For at gøre dette skal du udføre et grundigt toiletkønsorganer. Saml 50-60 ml urin i en steril plastbeholder. For at sikre materialets renhed anbefales det, at kvinder sætter en tampon ind i skeden, og at mænd trækker hudfolden så meget tilbage som muligt. Doner ikke under din menstruation.
- For at donere sæd skal du afstå fra samleje i 3 dage før prøvetagning. Læger fraråder også at besøge saunaen og tage et varmt bad, drikke alkohol og krydret mad. Du skal undlade at urinere 3 timer før testen.
- For at tage en urogenital smear, for eksempel, hvis der udføres en PCR-test for klamydia, rådes både kvinder og mænd til at have seksuel hvile i 3 dage. Antibakterielle lægemidler bør ikke tages 2 uger før analysen. I en uge skal du holde op med at bruge intime geler, salver, vaginale stikpiller, skylning. 3 timer før undersøgelsen skal du undlade at tisse. Under menstruation udføres der ikke prøveudtagning, kun 3 dage efter ophør af blodudledning kan du tage en urogenital udstrygning.
PCR under graviditet
I den periode, hvor barnet forventes, er mange seksuelt overførte infektioner ekstremt farlige for fosterets normale udvikling. STD'er kan fremkalde intrauterin væksthæmning, abort eller for tidlig fødsel, medfødte misdannelser hos barnet. Derfor er det ekstremt vigtigt at gennemgå en PCR-undersøgelse i den tidlige graviditet. Det er nødvendigt at bestå analysen ved registrering - op til 12 uger.
Materialet tages fra livmoderhalskanalen med en speciel børste. Proceduren er smertefri og udgør ikke en fare for barnet. Norm alt under graviditeten udføres en analyse for klamydia ved PCR-metoden såvel som for ureaplasmose, mycoplasmose, cytomegalovirus, herpes, papillomavirus. Sådan et kompleks af undersøgelser kaldes PCR-6.
PCR til HIV-diagnose
På grund af det faktum, at polymerase-kædereaktionsmetoden er meget følsom over for ændringer i kroppen og betingelserne for diagnosen, kan mange faktorer påvirke resultatet. Derfor er PCR-analyse for HIV-infektion ikke en pålidelig metode, dens effektivitet er 96-98%. I de resterende 2-4 % af tilfældene giver testen falsk positive resultater.
Men i nogle situationer er HIV PCR-diagnostik uundværlig. Det gives norm alt til personer med et falsk-negativt ELISA-resultat. Sådanne indikatorer indikerer, at en person endnu ikke har udviklet antistoffer mod virussen, og de kan ikke påvises uden en multipel stigning i antallet. Det er præcis, hvad der kan opnås ved at udføre en PCR-blodprøve.
Denne diagnostik er også nødvendig for børn i det første leveår født af en HIV-positiv mor. Metoden er den eneste måde til pålideligt at bestemme et barns status.
PCR til diagnosticering af hepatitis
Polymerase-kædereaktionsmetoden gør det muligt at detektere DNA'et fra hepatitis A, B, C-virus længe før dannelsen af antistoffer mod infektionen eller starten af symptomer på sygdommen. PCR-analyse for hepatitis C er særlig effektiv, da denne sygdom i 85% af tilfældene er asymptomatisk og udenrettidig behandling går ind i den kroniske fase.
Rettidig påvisning af patogenet vil hjælpe med at undgå komplikationer og langtidsbehandling.
Omfattende PCR-undersøgelse
Kompleks PCR-analyse: hvad er det? Dette er en undersøgelse ved hjælp af den polymere kædereaktionsmetode, som omfatter bestemmelse af flere typer infektioner samtidigt: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes type 1 og 2, gonoré, papillomavirus. Prisen på sådan diagnostik varierer fra 2000 til 3500 rubler. afhængig af klinikken, de anvendte materialer og udstyr, samt af typen af analyse: kvalitativ eller kvantitativ. Hvad er nødvendigt i dit tilfælde - lægen vil afgøre. I nogle tilfælde er det nok bare at bestemme tilstedeværelsen af patogenet, i andre, for eksempel med HIV-infektion, spiller en kvantitativ titer en vigtig rolle. Ved diagnosticering af alle ovennævnte patogener kaldes undersøgelsen "PCR-12-analyse".
Transskription af analyseresultater
Det er ikke svært at dechifrere PCR-analysen. Der er kun 2 skalaer af indikatoren - "positivt resultat" og "negativt resultat". Når et patogen opdages, kan læger bekræfte tilstedeværelsen af sygdommen med 99% sikkerhed og begynde at behandle patienten. Med en kvantitativ metode til bestemmelse af infektion vil den tilsvarende kolonne angive den numeriske indikator for påviste bakterier. Kun en læge kan bestemme omfanget af sygdommen og ordinere den nødvendige behandling.
I nogle tilfælde, f.eks. når man bestemmer HIV-infektion ved PCR, med et negativt resultat, bliver det nødvendigt at udføre yderligere undersøgelser for at bekræfte de opnåede indikatorer.
Hvor bliver man testet?
Hvor skal man tage en PCR-test: i en offentlig klinik eller i et privat laboratorium? Desværre er udstyret og metoderne i kommunale lægeinstitutioner ofte forældede. Derfor er det bedre at give fortrinsret til private laboratorier med moderne udstyr og højt kvalificeret personale. Derudover vil du i en privat klinik få resultater meget hurtigere.
I Moskva tilbyder mange private laboratorier PCR-analyser for forskellige infektioner. For eksempel i sådanne klinikker som Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, udføres PCR-analyse. Prisen for undersøgelsen er fra 200 rubler. for at identificere ét patogen.
Det kan konkluderes, at diagnosticering af infektionssygdomme ved PCR i de fleste tilfælde er en hurtig og pålidelig måde at påvise patogenet i kroppen i de tidlige stadier af infektion. Men stadig i visse tilfælde er det værd at vælge andre diagnostiske metoder. Kun en specialist kan bestemme behovet for en sådan undersøgelse. At dechifrere PCR-analysen kræver også en professionel tilgang. Følg din læges råd, og tag ikke prøver, du ikke har brug for.
